常温运输和保存

动物DNA纯化试剂盒（过柱法）

Animal DNA Purification Kit

使用手册V1.0

产品及特点

本产品主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。它具有下列特点：

1. DNA更加纯净，大多数DNA样品的OD260/280值在1.8-1.9之间。

2. DNA产率一般在200 mg/g左右(跟组织种类密切相关)。

3. 可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。

4. 操作更加简单，离心吸附操作代替离心沉淀，整个过程室温操作约10分钟，适合大规模样品处理。

5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

6. 性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

本产品采用大扁盒包装

运输及保存

常温运输和保存、有效期一年。

自备试剂

氯仿（也可省略，但产量会降低）

使用方法

注意：动物DNA纯化溶液A容易产生沉淀，动物DNA纯化溶液B十分粘稠，用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分摇匀。

1. 根据使用材料的不同进行下列操作：

a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入0.8 mL预热的动物DNA纯化溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到1.5 mL 塑料离心管中。

b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106悬浮细胞中加入0.8 mL预热的动物DNA纯化溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5 mL 塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma 细胞，0.8 mL动物DNA纯化溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。

c) 对新鲜或冷冻的组织：先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10 mL或15 mL塑料离心管中，每50-100 mg组织加0.8 mL预热的动物DNA纯化溶液A，用剪切式匀浆器匀浆30秒左右，然后把裂解液转移到1.5 mL 塑料离心管中。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50 mg。

d) 对非冻型DNA保存液保存的组织：先用纸吸去保存液后再剪切成小块，其余操作同新鲜或冷冻组织的处理。

2. 加入0.4 mL预热的动物DNA纯化溶液B到裂解液中。由于动物DNA纯化溶液B十分粘稠，可将1mL枪头剪掉一截再用，也可以用称量方法加0.4 g。加入动物DNA纯化溶液B后需要颠倒数次充分混匀。

3. 65℃水浴5-10分钟。如果室温放置，DNA产量将降低10-20%。

4. 加入0.2 mL自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30秒，此时溶液将呈乳白色。一定要确保离心管底的液体被震荡起来。

5. 12000-15000×g室温离心2分钟。上清透明，中间层为白膜（蛋白层）。

6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中，避免触及中间的白膜。

7. 每个管中加入1.5倍体积的动物DNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。

8. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000-15000×g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000-15000×g室温离心半分钟，弃穿透液）。

9. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000×g室温离心半分钟，弃穿透液。

10. 加0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000×g室温离心半分钟，弃穿透液。

11. 12000-15000×g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。

12. 室温放置半分钟使残留乙醇挥发。

13. 将离心吸附柱转移到一新的1.5 mL塑料离心管中，加入50-100 mL DNA洗脱液（基因组DNA专用），室温放置离心吸附柱1-2分钟。

14. 12000-15000×g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

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