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| 商品重量: | 0克 |
| 名称: | 小反刍兽疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
| 货号: | ORS1538RT-T |
| 储存条件: | -20℃以下冷冻避光贮存 |
| 有效期: | 12个月 |
小反刍兽疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品编号：ORS1538RT-T
- 产品简介
- 引用文献
- 实验方案
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产品名称:
小反刍兽疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品货号:
ORS1538RT-T
名称:
小反刍兽疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
货号:
ORS1538RT-T
储存条件:
-20℃以下冷冻避光贮存
有效期:
12个月
货品计量单位:
盒
主要用途:
该产品仅供科研使用，说明书以实际到货说明书为准！
供货周期:
1-5天
小反刍兽疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
【产品名称】 小反刍兽疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
【包装规格】 50T/盒
【货号】 ORS1538RT-T
【产品简介】
小反刍兽疫病毒（PPRV）是引发小反刍兽疫的病原体，该疫病传播迅速且呈急性发作，被世界动物卫生组织（WOAH）列为法定报告疾病。病毒主要侵袭山羊和绵羊，导致高热、腹泻及肺炎，在易感群体中致死率高达 80%。作为全球根除计划的核心目标，PPRV防控对保障畜牧业至关重要，因此早期快速检测其基因具有重大防疫意义。
本试剂盒采用荧光探针qRT-PCR的方法，针对小反刍兽疫病毒的保守基因区域设计特异性引物及探针，可进行定量或定性检测。
【试剂组成】
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成分
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编号
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规格
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酶混合液
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试剂一
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500 µL×1 管
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PCR反应液
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试剂二
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450µL×1 管
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模板稀释液
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试剂三
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1 mL×1 管
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高浓度标准品
（107copies/μL）
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试剂四
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50 µL×1 管
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说明书
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1份
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注意：高浓度标准品用于制备绝对定量的标准曲线，但易污染检测样本，需要在远离样本的区域
用带滤芯的枪头先稀释成103 copies/μL，方可作为阳性对照使用。
【储存条件及有效期】
-20℃, 避光保存、运输、反复冻融少于7次，有效期12个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR检测仪。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 RNA提取
1 核酸提取请参照相关商品RNA提取试剂盒说明书进行操作即可。
2. Probe RT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行，冰上操作）
2.1 从-20℃以下冰箱中取出试剂盒，在室温融化后置于冰上。待完全溶解后上下颠倒轻轻混匀（请不要使用振荡器进行混匀），尽量避免出现泡沫并低速离心10s。
2.2 根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份），每测试反应体系配制如下表：
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试剂
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酶混合液
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PCR 反应液
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用量(样本数为N)
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10 μL
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9 μL
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注意：因PCR反应液中含有探针，最好避光，或者使用棕色管进行配制；短时间光照无影响，操作时间过长，建议避光。
根据测试样品的数量计算好各试剂的使用量，加入到适当体积试管中，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装19 μL反应混合液，盖上管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。
2.3 加样（在样本处理区进行）
将制备的核酸样本、阳性对照（103 copies/μL）各取1 μL分别加入PCR管中，盖好管盖，低速离心30秒后立即进行PCR扩增反应。
注意：每孔反应液中RNA模板量小于200 ng。
将 PCR 反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。
3. 上机检测（在检测区进行）
将PCR反应管放入荧光PCR检测仪内，按照下表设置核酸扩增相关参数，选择FAM荧光通道。
推荐循环参数设置：
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阶段
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循环数
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温度
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时间
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FAM荧光信号采集
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反转录
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1×
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42℃
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30 min
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否
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预变性
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1×
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95℃
|
5 min
|
否
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变性
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40×
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95℃
|
10 s
|
否
|
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退火/延伸
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60℃
|
40 s
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是
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4. 结果分析判定
4.1 结果判断
当同时满足以下条件时可判定试验成立，否则试验无效：
阳性对照：FAM通道Ct值≤35；
阴性对照：FAM通道无Ct值或Ct值＞35。
4.2 检测结果
(1) 进行定量检测时，需以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA拷贝数浓度的log值，再推算出其拷贝数浓度。
(2) 进行定性检测时，如果无Ct或Ct大于或等于35，则为阴性。如果Ct小于35，则为阳性。
【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染；
实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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实验方案
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