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| 商品重量: | 0克 |
| 包装规格: | 50T |
| 种属: | 犬 |
| 性状: | 液体 |
| 样本类型: | 犬副流感病毒 |
副流感病毒3型探针法RT-PCR试剂盒
商品编号：ORSE072CA
- 产品简介
- 引用文献
- 实验方案
- 相关产品
产品名称:
副流感病毒3型探针法RT-PCR试剂盒
商品货号:
ORSE072CA
包装规格:
50T
种属:
犬
性状:
液体
样本类型:
犬副流感病毒
灵敏度:
样本检测结果：Ct 值<38，有明显指数增长，表明样本中检测出该病毒，结果为阳性； Ct 值>40 或无 Ct 值，表明样本中未检测出该病毒，结果为阴性；Ct 值在 38-40 范围，应 对样本进行复检，如重复实验结果 Ct 值仍在 38-40 范围，有明显指数增长，则判定为阳 性，否则为阴性
存储条件:
低温运输，-20℃保存，阳性对照需要单独放置，不要污染其他试 剂。
有效期:
12个月
货品计量单位:
盒
主要用途:
该产品仅供科研使用，说明书以实际到货说明书为准！
供货周期:
5-10天
犬副流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
本试剂盒可用于检测犬副流感病毒。犬副流感病毒(Canine Parainfluenza Virus，CPIV)
是一种 RNA 病毒，会引起感染，是一种感染示犬的主要的呼吸道传染病。感染后临床表
现发热、流涕和咳嗽。病理变化以卡他性鼻炎和支气管炎为特征，因此灵敏快捷的诊断
产品具有重要的意义。本产品是根据探针法荧光定量 RT-PCR 原理开发的犬副流感病毒检
测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物等组分经过优化，灵敏度高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据犬副流感病毒 RNA 序列高度保守区设计，不会跟其他病
毒的 RNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数
量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。
成分规格
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产品组成
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编号
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规格
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2 × OneStep Probe Mix
|
GZ021101a
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550 μL
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OneStep Probe Enzyme Mix
|
GZ021102b
1
|
110 μL
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|
DEPC-H
2
O
|
GZ070401
|
1 mL
|
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荧光模板稀释液
|
GZ070407
|
1 mL |
|
犬副流感病毒 RT-qPCR 引物-探针混合液
|
GZ1530500yp
1
|
160 μL
|
|
犬副流感病毒 RT-qPCR 阳性对照
(1×10E8 拷贝/μL)
|
GZ1530500pc
|
50 μL
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保存条件
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试
剂。
使用方法
一、RNA 提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。建
议使用病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒（Cat: GZ010702-50）提取 RNA。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样
品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，
得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡
1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡
1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释到 1×10E5 拷贝/μL 即可。
三、试剂配制(试剂准备区)
准备足量的 PCR 管(样品管、阴性对照管、阳性对照管)，向各 qPCR 管中分别加入
下列成分。
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成分
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样品管
N+2 个
|
qPCR
阴性对照
|
qPCR
阳性对照
|
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2 × OneStep Probe Mix
|
各 10 μl
|
10 μl
|
10ul |
|
OneStep Probe Enzyme Mix
|
各 2 μl
|
2ul | 2ul |
|
犬副流感病毒 RT-qPCR 引物-探针混
合液
|
各 3 μl
|
3ul | 3ul |
转移至模板添加区。
四、添加模板(模板添加区)
向 qPCR 管中分别加入 5 μL 模板，顺序为阴性对照（DEPC-H
2
O）、待测样品模板、
犬副流感病毒 RT-qPCR 阳性对照，离心 30 秒，立即进行扩增反应。
五、扩增反应(扩增及产物分析区)
将 qPCR 管放置在 qPCR 扩增仪器样品槽相应位置，进行扩增，扩增程序如下：
|
过程
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温度
|
时间 |
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逆转录
|
50℃
|
20 min
|
|
预变性
|
95℃
|
10 min
|
|
qPCR 反应
（45 个循环）
|
95℃，60℃
|
15 sec，60 sec
|
|
信号通道
|
FAM 通道采集荧光信号
|
- |
六、结果分析
1. 如果制作标准曲线，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标
准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，推算出其浓
度。
2. 如果未制作标准曲线，按照如下标准判定结果：
阳性对照结果：Ct 值<30，有明显指数增长，呈典型的 S 型曲线。
阴性对照结果：Ct 值>40 或无 Ct 值，无明显指数增长期和平台期。
样本检测结果：Ct 值<38，有明显指数增长，表明样本中检测出该病毒，结果为阳性；
Ct 值>40 或无 Ct 值，表明样本中未检测出该病毒，结果为阴性；Ct 值在 38-40 范围，应
对样本进行复检，如重复实验结果 Ct 值仍在 38-40 范围，有明显指数增长，则判定为阳
性，否则为阴性。
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实验方案
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