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| 别名: | GST 标记蛋白质微量纯化试剂盒 |
| 存储条件: | 常温运输和保存，谷胱甘肽-琼脂糖溶液，GST 洗脱缓冲液成分二，溶菌酶，20 KU/mg 需 常温运输 4℃保存，Benzonase 溶液，1 U/L 和 PMSF 溶液，10 mg/mL 需低温运输， -20℃保存。 |
| 有效期: | 1年 |
| 主要用途: | 该产品仅供科研使用，说明书以实际到货说明书为准！ |
GST 标记蛋白质微量纯化试剂盒
重组蛋白 N 端的 GST（谷胱甘肽 S 转移酶，Glutathione S Transferase）能提高重
组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达
组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达
商品编号：ORCCH001
- 产品简介
- 引用文献
- 实验方案
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产品名称:
GST 标记蛋白质微量纯化试剂盒
商品货号:
ORCCH001
别名:
GST 标记蛋白质微量纯化试剂盒
存储条件:
常温运输和保存，谷胱甘肽-琼脂糖溶液，GST 洗脱缓冲液成分二，溶菌酶，20 KU/mg 需 常温运输 4℃保存，Benzonase 溶液，1 U/L 和 PMSF 溶液，10 mg/mL 需低温运输， -20℃保存。
有效期:
1年
主要用途:
该产品仅供科研使用，说明书以实际到货说明书为准！
GST 标记蛋白质微量纯化试剂盒
GST Tagged Protein Micropurification Kit
产品及特点
重组蛋白 N 端的 GST（谷胱甘肽 S 转移酶，Glutathione S Transferase）能提高重
组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的
蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯
化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记
蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 溶液，可吸附 5-10 mg GST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
规格及成分
本产品使用小扁盒包装
成分
编号
规格
包装
谷胱甘肽-琼脂糖溶液，50%
220227a
4 mL
5 mL 本色瓶
10×PBS 缓冲液
220227b
100 mL 125 mL本色瓶
GST 标签蛋白纯化溶液 A
220227c
1 mL
1.5 mL 蓝盖管
GST 洗脱缓冲液成分一
220227d1
25 mL
30 mL 本色瓶
GST 洗脱缓冲液成分二
220227d2
80 mg
0.5 mL 棕色管
溶菌酶，20 KU/mg
210808
30 mg
0.5 mL 棕色管
Benzonase 溶液，1 U/L
220969
100 L 0.5 mL 红盖管
PMSF 溶液，10 mg/mL
6-2628
1 mL
1.5 mL 白盖管
6 mL 层析柱(带筛板)
11-231103
1 套
塑料袋
使用手册
220227sc
1 份
1 份
运输及保存 常温运输和保存，谷胱甘肽-琼脂糖溶液，GST 洗脱缓冲液成分二，溶菌酶，20 KU/mg 需
常温运输 4℃保存，Benzonase 溶液，1 U/L 和 PMSF 溶液，10 mg/mL 需低温运输，
-20℃保存。有效期一年
自备试剂
超纯水
使用方法 一：重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8 小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000×g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。1×PBS 缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的 10×
PBS 缓冲液而得。PBS 缓冲液极其容易长细菌，注意防止污染。
二：细胞裂解
5. 如果用超声波破碎细胞，先用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液重悬细菌沉淀（细胞
裂解液的配制方法：在 1 mL 1×PBS 缓冲液中加入 50 L 溶液 A 和 50 L 10 mg/mL
的 PMSF 溶液，混匀即可）。冰上超声裂解重悬菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞
破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次 20
秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6. 如果用酶法破裂细胞，则在 1 mL 冰浴的、新鲜配制的细胞裂解液重悬细菌（细胞裂解
液配制方法：在 1 mL 1×PBS 缓冲液中加入 1.5 mg 溶菌酶干粉、50 L10 mg/mL
的 PMSF 溶液和 5 L Benzonase 溶液，混匀即可）。将重悬细菌冰上放置 30 分钟，
得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法得到的细胞裂解物在 13000×g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解
细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。预留少量（如 100 L）作为
裂解液留样，其余用于第 10 步的过柱。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将 4 mL 谷胱甘肽-琼脂糖介质充分混匀后，全部加入到预放了一片筛板的层析柱中
（介质的最低用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液最少需要使用 200 L
介质。此处加 2 mL 则绰绰有余）。下列步骤各溶液的用量均针对 4 mL 介质而定，如
果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 40 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，
收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流
速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标
记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌
裂解液和介质在 4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 10 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）并预留
100 L 作为穿透液留样，其余在确认实验成功后再丢弃。
12.用 0.2-0.5 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液，此穿透液即纯化的 GST 标记蛋
白样品。GST 洗脱液的配制方法是将约 80 mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到 GST
洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得 GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保
存，每次用一管。由于它可能含蛋白酶污染，所以纯化样品不能在 4℃长期放置，需留
100 L 左右用于后续浓度测定或/和 SDS-PAGE 电泳，其余放-80℃长期放置。13.用裂解液留样（第 7 步）、穿透液留样（第 11 步）和纯化样品留样（第 12 步）进行
蛋白定量或/和 SDS-PAGE 分析。注意：本操作没有预先脱盐，故只能用 Bradford 法
或 OD 检测法测定裂解液留样、穿透液留样和样品留样的蛋白浓度。按 OD 检测法，1
OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE
胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
附：GST 柱的恢复（本试剂盒不含所需试剂）
1. 用 3 倍介质体积的 6 M 盐酸胍处理柱子 10 分钟。介质为 2 mL 则用 6 mL，下同。
2. 用 3 倍介质体积的超纯水处理柱子 10 分钟。
3. 用 3 倍介质体积的缓冲液一（0.5 M NaCl，0.1 M TrisHCl，pH 8.5）处理柱子 10
分钟；用 3 倍介质体积的缓冲液二（0.5 M NaCl，0.1 M TrisHCl，pH 4.5）处理柱
子 10 分钟。此步骤重复两次。
4. 用 3 倍介质体积的超纯水处理柱子 3 次。
5. 若需要立即使用，则用 3 倍介质体积的 1×PBS 缓冲液处理柱子 2 次。堵上漏口，加 3
倍介质体积的 1×PBS 缓冲液洗涤后立即使用。
6. 若长时间不用，则上步的 1×PBS 改成 20%的乙醇，其余操作完全相同。
疑难解答 Q：为何 GST 蛋白不与介质结合或结合很弱？
A：可能原因及解决办法：标签蛋白变性（使用温和裂解方法）、标签蛋白聚集（补加 DTT）、
标记蛋白浓度太低（浓缩样品）、标记蛋白改变了 GST 的构型（降低结合时的温度）、结
合时间太短（延长蛋白与吸附柱的结合时间）。
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